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培养基配制及时灭菌的重要性

更新时间:2019-03-25      点击次数:5031

培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般有碳源、氮源、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基是提供细胞营养并促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的适宜生存营养环境。所以,在培养基配制好后需要立即灭菌,大限度减少有效营养成分的流失。

 

培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、富集培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。

 

培养基配成后一般需进行性能测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,推荐现配现用。

 

培养基制备过程

 

1.配料

配方换算→在容器中加入少量蒸馏水→按照配方称取各种药品(依次加入)→溶解煮沸

 

2.溶解

加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌,推荐老师们使用磁力加热搅拌器,以防止烧焦并避免操作人员烫伤。

 

3.调PH

用1mol盐酸或1mol氢氧化钠溶液,调节培养基pH值到所适宜的范围内。

 

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。(现在以不常见)

 

5.分装

一般培养基放在三角瓶、试剂瓶或试管中进行灭菌,待冷却后使用。有部分特殊培养基,需要灭菌后,静置冷却至45-48摄氏度,加入无菌辅料(如脱纤维羊血)。

 

(1) 液体培养分装

若作静置液体培养,则100ml培养基/150ml的三角瓶或125ml旋口瓶。Tuttnauer灭菌器有*的液体灭菌程序,能提高单瓶的有效装载容积,从而提高培养基的配置数量,以此在培养基性能测试中,为用户节约更多花费。

三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。

 

(2) 固体培养基

固体培养基则200ml培养基/250ml的三角瓶或旋口瓶,420ml培养基/500ml旋口瓶,约单瓶的4/5高度;固体斜面培养基一般装5-6ml,约试管的1/3高度。

6.包扎

分装好后的三角瓶塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

 

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌时温度不稳定,会造成营养成分被高温分解,培养基中的碳源、微量氨基酸会使培养基的颜色变深,造成同种培养基不同批次的颜色各不相同。这时培养基性能测试报告该如何完成,废弃成本高昂,继续使用影响测试结论怎么办?用Tuttnauer灭菌器,能为您提供的温度控制,从根本上解决您的烦恼。

 

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的2/3。

 

9.贮存

固体培养基带凝固后和液体培养基冷却至室温存放于2-8℃冰箱中备用。

 

10.培养基性能测试

不管什么类型的培养基,都需要进行培养基性能测试。目的有二,一是确保高压灭菌后的培养基是*无菌的;二是确保培养基营养成分能使细胞或微生物能健康生长。一个完整的培养基性能测试,应该包括阳性生长测试、阴性菌生长测试和无菌性能测试。

 

培养基配制好后为什么必须立即灭菌?

 

大家都知道,培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异。为了达到实验和研究的目的,要按照培养基的配方进行配制。而任何一种培养基制成后应及时*灭菌,以备培养使用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。

 

发酵过程中,培养基灭菌主要有以下几个原因:如不灭菌或灭菌不*,会使生物反应的基质或产物,会因环境菌的生长而消耗营养物质,造成生产能力的下降;环境菌会产生代谢产物,这就会特定产物的提取更加困难,造成提纯率降低,产品质量下降;环境菌大量繁殖后,会改变反应液的pH值,使反应异常;有些环境菌会分解产物,使生产失败;如果发生噬菌体污染,生产菌细胞将被裂解,使生产失败。

 

培养基灭菌是杀灭培养基中本身的原宿菌群或在空气中附着的环境菌,更好的让目标菌生长(减少环境菌消耗培养基中的营养物质,而且有些环境菌生长使会产生抑制目标菌生长的特殊产物)。一般人工培养细胞或细菌,基本上是尽可能让其生长快速或者产生代谢产物,因此就让其在适培养基上生长,以缩短培养时间与提高经济效益。其中,在生产前进行培养基性能测试的意义,直观的显现就是避免,生产成本的浪费,简言之就是以小博大。

 

采用哪种高压蒸汽灭菌,推荐Tuttnauer高压灭菌器

 

*、灭菌效果强、安全性高、可选配真空干燥功能、防止培养基爆沸功能、全寿命长(曾有客户使用超过18年),是具备《进口压力容器生产许可证》、《进出口锅炉压力容器安全性能检验证书》、《计量证书》等证书齐全的灭菌器。

Tuttnauer全自动高压蒸汽灭菌器开关门轻松简便,舱门仅在通电时才可开启,避免因断电或关机时意外泄漏未灭菌物质。高压蒸汽灭菌器全彩显示屏清晰显示同时更加直观的显示,灭菌过程各阶段所处的状态,温度、压力、程序及操作过程中的其它相关信息。高压蒸汽灭菌器脉动真空时,腔室内空气净化经过超滤过滤器再排出腔体外,避免腔内为灭菌气体外溢,减少环境中的二次污染情况的发生,更好的保护操作人员。在压力与温度匹配时,腔体内是有两只可移动的物料探头可以更加的控制温度,从而产生过饱和蒸汽压保证灭菌效果。高压蒸汽灭菌器可根据被灭菌物质性状决定降温速率从而缩短灭菌过程的单位时间。如液体装载灭菌时采用快速冷却功能,通过在腔体外壁上紧紧盘绕的冷却管中流动的自来水,快速带走腔体内的热量,同时培养基不会因此发生爆沸的情况,缩短灭菌过程时间,提高灭菌器的使用效率。

 

Tuttnauer高压蒸汽灭菌器通过真空泵及经0.2um的滤膜过滤后的热空气快速干燥样品,使其快速可用。高压蒸汽灭菌器标配两只物料温度探头,验证两个孔,方便进行灭菌效果验证。高压蒸汽灭菌器可设置多重脉冲,预真空设备配置强大的真空泵可以快速排空腔内残留的空气,使饱和蒸汽更好的穿透灭菌物品,从而确保充分有效的灭菌效果。

 

当然,除了以上证书、功能方面的因素,选择合适的供应商也是非常重要的。选对好的产品可以保证更好应用体验及的服务。以*的以色列Tuttnauer高压灭菌器,现在推出了面向实验室的机型,供广大消费者选择。Tuttnauer,您的感控伙伴。

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